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酶底物法檢較臟水樣中大腸菌群時的稀釋問題

來源:西安海研生物科技公司         發布時間:2019-03-27

酶底物法檢較臟水樣中大腸菌群時的稀釋問題

日常微生物檢測中,當面臨著水體污染嚴重的水樣檢測結果已超出檢測限時,這時就需要我們對水樣進行稀釋。

目前《水與廢水標準檢測法》、《生活飲用水標準檢驗方法》中的多管發酵法、濾膜法或是酶底物法,就算是定量范圍(1-2419MPN/100ml)的酶底物法面對較臟的地下水或者排污口的水樣也需要稀釋到100倍甚至1000倍。我們都知道,微生物實驗的不穩定性,當我們進行稀釋時,結果固然會有影響,我們要做的就是盡量減少誤差。

1、實驗步驟越少,結果偏差也會越小,所以酶底物法步驟少,會更有優勢。

2、在做稀釋時,應保證取樣量大,譬如10倍稀釋:取10ml原液+90ml無菌水配成100ml10倍稀釋液①;若是要百倍千倍稀釋,則需要進行梯度稀釋,由①中的10倍稀釋樣再取10ml,再加90ml無菌水,此時完成了100倍的稀釋。若是千倍稀釋,則需要從100倍稀釋樣中再取 10ml進行稀釋。

3、每次再去原液時,取樣的均勻程度直接影響了后面的稀釋結果,故我們在每次取樣前必須充分搖勻。

4、為了使數據更加地穩定及接近真實值,建議每個梯度稀釋做平行樣。這時,我們可以設計成取20ml原液加180ml無菌水配成200ml樣或者取30ml加270ml無菌水配成300ml10倍稀釋樣,以此往下做梯度稀釋。若是未知樣且濃度可能會很高的時候,我們建議這樣去稀釋,因為這樣我們便可以保證每個梯度至少有一個樣。若已經大概了解水樣來源及濃度,可直接梯度稀釋到我們要的濃度,并做2-3個平行樣。

5、對于未知樣需要進行濃度的摸索,無論是多管還是酶底物法,都會有較大工作量。前期的梯度稀釋及每個梯度做平行樣都是無法避免的,當我們后期對水樣濃度有了把握后便可以直接稀釋到某個濃度,這樣就減少許多的工作量了。由于酶底物法是已滅菌可直接用的選擇性培養 基,比起多管法會更加簡便、不用洗大量的管子。另外濾膜法在做臟水時就完全不適合了。

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