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水中糞大腸菌群的常見檢測方法

來源:西安海研生物科技公司         發布時間:2019-03-27

水中糞大腸菌群的常見檢測方法

水是人類賴以生存的基礎,隨著人類社會生產的發展和技術的進步,水質污染現象日趨嚴重。病原微生物污染是我國水體污染的主要原因之一。污染水體的病原微生物種類繁多,而水中糞大腸菌群是水體糞便污染的指示菌,通過監測該項目可以正確的判斷監測水域內污染程度,有效預報和控制流行疾病的發生與傳播。

常見的水中糞大腸菌群檢測方法如下:

1、多管發酵法

通過將污染水樣接種入多根試管中進行恒溫培養,利用大腸菌群繁殖時使乳糖發酵,并能使乳糖蛋白胨培養液變黃,同時產生氣泡的特有現象,根據不同接種量的發酵管所表現陽性結果的數目,從MPN表中查的相應的MPN指數,計算每升水中糞大腸菌群的最近似值。

2、濾膜法

將水樣注入已滅菌的放有孔徑為0.45μm濾膜的濾器中,經過抽濾,將細菌截留在膜上,然后將濾膜貼于M-FC培養基上,經44.5℃溫度下進行培養,計數培養基上呈藍色或藍綠色的菌落,計算出每升水的糞大腸菌數。

3、紙片法

采用紙片、紙膜、膠片等作為培養基載體,將特定的培養基和顯色物質附著在上面,通過糞大腸菌群在上面的生長、顯色來測定的方法,即糞大腸菌在紙片培養基上呈紅色菌落,菌落周圍產生黃圈是糞大腸菌分解乳糖產酸使指示劑變色的結果。

4、酶底物法

將加入酶底物檢測試劑的100ml水樣注入51孔或97孔的定量測量盤中進行密封后培養,由于大腸菌群細菌能產生一種β-半乳糖苷酶分解PG使得培養液呈黃色,同時大腸埃希氏菌可以產生葡萄糖醛酸酶分解MUG,培養液將會在波長366nm紫外光下產生熒光反應。通過計算有黃色反應和熒光反應的孔穴數,可對照MPN表查出其代表的糞大腸菌群最可能數水中糞大腸菌群。

5、聚合酶鏈式技術

提取糞大腸菌群混懸液和待測水樣的DNA,利用PCR技術擴增編碼約260bp的LacZ基因(β-半乳糖苷酶基因)和約150BP的UdiA基因(β-D-半乳糖苷酶基因)的DNA片段,分別檢測大腸菌群數和大腸桿菌。

6、熒光原位雜交技術

由于糞大腸菌群特異的DNA序列,借助熒光標記的特異寡聚核苷酸片段作為的探針與待測水樣中的DNA分子雜交,將雜交細胞經熒光檢測體系在鏡下對待測DNA進行定性、定量分析,確定菌群數。

目前,大腸菌群檢測方法發展很快,已提高到分子生物學水平,使檢測更快速、酶底物法以其操作簡便、檢測周期短,將取代多管發酵法、濾膜法等傳統方法,尤其是酶底物法采用密封培養技術,在檢測醫院污水時可以減少人員接觸而降低檢測人員的致病風險,因此具有更強的實用價值和應用價值,正是目前水中糞大腸菌群的快速檢測標準方法之一。

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